OCI-LY10細(xì)胞培養(yǎng)基

細(xì)胞名稱(chēng)：OCI-LY10     彌漫大B細(xì)胞**瘤細(xì)胞
組織來(lái)源：B**細(xì)胞
培養(yǎng)條件：1640 +10% FBS 
形　　態(tài)：懸??；**母細(xì)胞樣

OCI-LY10細(xì)胞培養(yǎng)基傳代操作：

       1.吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。
       2.加入無(wú)菌pbs洗液（5-8mL）輕輕潤(rùn)濕細(xì)胞，稀釋多余的培養(yǎng)基，之后吸走洗液，動(dòng)作要輕，不可吹打到細(xì)胞。
       3.向瓶?jī)?nèi)加入含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許，以能覆滿瓶底為限。 
       4.置溫箱中2~5分鐘，一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，細(xì)胞變圓，比較松動(dòng)后，立即終止消化。
       5.加入該細(xì)胞對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基6mL（T25培養(yǎng)瓶）或12mL（T75培養(yǎng)瓶）終止消化。
       6.用吸管通過(guò)吸取的培養(yǎng)基輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，OCI-LY10細(xì)胞培養(yǎng)基使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)應(yīng)盡量以*少的次數(shù)將細(xì)胞從壁上吹下，不僅要控制吹打的力度、次數(shù)，還要注意要將細(xì)胞盡可能吹成單個(gè)。這樣既能減少死細(xì)胞，又能便于細(xì)胞再次均勻貼壁生長(zhǎng)。
       7.依據(jù)傳代比例，將細(xì)胞懸液分瓶，再補(bǔ)充培養(yǎng)基后，靜置于溫箱培養(yǎng)，直止貼壁。
        貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，繼續(xù)生長(zhǎng)的空間不足，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成份也消耗較多，同時(shí)代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養(yǎng)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。對(duì)于貼壁不太緊的細(xì)胞如293，可以直接吹散后分瓶。而對(duì)于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶。以筆者的經(jīng)驗(yàn)，以輕吹或加培養(yǎng)液后輕搖可下較好，但對(duì)于經(jīng)驗(yàn)不太充分的實(shí)驗(yàn)者而言是較難判斷掌握的。
對(duì)于懸浮細(xì)胞換液時(shí)只需要補(bǔ)液就行。
        懸浮細(xì)胞的傳代則不需要用胰酶消化，OCI-LY10細(xì)胞培養(yǎng)基直接通過(guò)計(jì)數(shù)算好傳代的比例，直接分瓶，補(bǔ)液。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長(zhǎng)，此時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，當(dāng)補(bǔ)液時(shí)，避免吹打。典型實(shí)例：jurkat就是成團(tuán)生長(zhǎng)。當(dāng)jurkat細(xì)胞密度比較大時(shí)，可將培養(yǎng)瓶豎直放置2分鐘左右，待大部分細(xì)胞沉下，吸走上層清液，補(bǔ)充等量的新鮮培養(yǎng)基。而HL-60就不一樣了，為懸浮單個(gè)生長(zhǎng)，如果發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞包團(tuán)，說(shuō)明細(xì)胞狀態(tài)不好，不加以正確的處理，*終會(huì)發(fā)生凋亡。