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原代細胞培養(yǎng)實驗方法
日期：2024-11-23 21:56
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摘要：
原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。原代細胞在培養(yǎng)的過程中，也可能產(chǎn)生基因突變而形成無限傳代的細胞株，傳代次數(shù)越多，就越有可能變成細胞株（基因缺陷型），因此科學(xué)界也通常把**代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。
原代細胞培養(yǎng)實驗室常規(guī)步驟為：
1）將動物組織從機體中取出并**除去存留在組織上的**、病毒、**等污染源，這些污染源將會所需培養(yǎng)的原代細胞凋亡、停止生長和繁殖直至死亡，因此整個原代細胞培養(yǎng)過程中**在無菌狀態(tài)下進行。
2）將組織塊在選定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分鐘，通常在37C水浴里進行，而蛋白酶的選定取決于器官組織和所需細胞的類型，比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能分解而出單個細胞，但是對于腦組織和乳腺等軟組織，就只能用分解能力較弱的膠原蛋白酶， 以免損傷分散出來的單個細胞。
3）將分散而成的單個細胞置于合適的培養(yǎng)基（含有特殊細胞生長因子、添加劑以及血清， 或者無血清培養(yǎng)基）中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖， 整個過程都是在無菌情況下操作。
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